Обнаружение белка в моче пробой Геллера. Скачать книгу "Клинические лабораторные исследования" (2.84Mb) Приготовление реактива Ларионовой

Определение концентрации белка в моче методом разведения.

Р-вы 50% р-р азотной к-ты или р-в ларионовой. Ход определения: в штатив ставят ряд пробирак и наливают по 1 мл р-ра азотной к-ты доб-ть 1 мл мочи наслаивают на реактив и засекают время, при появлении кольца записываем время появления кольца. Если кольцо широкое делают разведение мочи.

4.Определение концентрации белка в моче с 3% сульфосалициловой кислотой.

Р-вы: 3% сск, хлорид натрия 9%, ст р-р альбумина 10%.Ход определения: В две мерные центрифужные пробирки «О» – опыт и «К» - контроль помещают по 1,25мл прозрачной мочи. В опытную прибавляют 3,75мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, в контрольную 3,75мл 0,9% раст-вора хлорида натрия. Оставляют на 5 мин., а затем фотометрируют на ФЭКе при длине во-лны 590 – 650нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 5мм опыт против контроля. Расчет ведут по калиб-ровочному графику ил таблице. Принцип метода основан на том, что белок с сульфосалици-ловой кислотой дает помутне-ние, интенсивность которого прямо пропорционально концентрации белка.

5.обнаружение глюкозы в моче проба Гайнеса-Акимова. Принцип : Глюкоза при нагревании в щелочной среде восстанавливает дигидроксид меди (желтого цвета) в моногидроксид меди (оранжево-красного цвета).Приготовление реактива : 1) 13,3 г хим. чистого кристаллического сульфата меди(СиSO 4 . 5 Н 2 О) раствор. в 400мл воды. 2) 50г едкого натра растворяют в 400мл воды. 3) 15г чистого глицерина разводят в 200мл воды. Смешивают первый и второй растворы и тотчас приливают третий. Реактив стоек. Ход определения : В пробирку вносят 1 каплю мочи и 9 капель реактива и кипятят на водяной бане 1-2 мин. Положительная проба : желтая или оранжевая окраска жидкости или осадка.

6. Качественное определение глюкозы в моче глюкооксидазным методом. Принцип метода : глюкоза окисляется в присутствии глюкозооксидазы, согласно реакции: Глюкоза + О 2 гликонолантом + Н 2 О 2 .Образующаяся перекись Н под действием перексидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта.

Приливаем и инкубируем 15 минут при 37 0 С. Смотреть на КФК, кювета 5мм.

Затем производят расчёты по формуле: С оп = Ext оп . Cст/ Ect cт.

7.Обнаружение кетоновых тел в моче пробой Лестраде. На предметное стекло наносят (на кончике скальпеля) порошка или таблетку р-ра Лестраде, а на него 2-3 капли мочи. При наличии кетоновых тел появится окраска от розового до фиолетового. Пробу оценивают на белом фоне.

8.Обнаружение кровяного пигмента в моче пробой с 5 % спиртовым раствором амидопирина.

1.5% спиртовой р-р амидопирина(0,5 г амидопирина растворяют в 10 мл спирта 96%)2.3% р-р перекиси водорода 1,5 г гидропирита растворяют в 50 мл воды)Ход методики:в пробирку наливают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки или взболтанной не фильтрованной мочи.добавляют 8-10 капель 5 % р-ра амидопирина и 8-10 капель 3% р-ра перекиси водорода;учитывают результат не позднее 2-3 мин.Проба считается положительной при наличии серо-фиолетового окрашивания.

Обнаружение уробилина в моче пробой Нейбауэра.

Основана на цветной реакции уробилиногена с реактивом Эрлиха,который сост.из 2 г парадиметиламинобенальдегида и 100 мл р-ра хлористоводородной к-ты(200 г.л).Ход определения.К нескольким мл свежевыделенной мочи приливают несколько капель р-ра Эрлиха(на 1 мл мочи и на 1 мл р-ра.Появление красного цв.в первые 30 с указывает на повыш.сод.уробилиногена.В норме окраска появляется позже или вообще отсут.При стоянии мочи уробилиноген превращается в уробилин и проба может быть ложноотрицательной.Пробу нельзя нагревать,т.к можно могут образоваться побочные комплексные соед,альдегида с порфиринами,индолом и лек.препаратами.

Обнаружение билирубина в моче пробой Розина.

Спиртовой р-р йода(10г.л):1 г кристаллического йода растворяют в цилиндре вместимостью 100 мл в 20-30 мл 96 гр.спирта-ректификата,а затем доб.доливают спиртом до метки.Ход определения.В хим.пробирку наливают 4-5 мл исследуемой мочи и осторожно наслаивают на нее спиртовой р-р йода(если моча имеет низкую относительную плотность,то следует наслаивать ее на спиртовой р-р йода).При наличии билирубина на границе между жидкостями обр.зелёное кольцо(при приёме антипирина,а также при сод.в моче кровяного пигмента проба оказывается положительной).У здорового человека эта проба отрицательна.

Исследование мочи методом сухой химии (моно- политестами).

Принцип. Метод основан на воздействии, оказываемом белком на цвет индикатора, находящегося в буферном растворе, в результате чего краситель изменяет цвет с желтого на синий.

При проведении реакции на присутствие белка в моче и определении pH с помощью индикаторной бумаги рекомендуется выполнить следующие указания:

1. Собрать мочу в тщательно вымытую посуду.
2. Использовать свежесобранную, не содержащую консервантов мочу.
3. Тщательно закрыть пенал после извлечения из него необходимого количества индикаторных полосок бумаги.
4. Не захватывать пальцами индикаторные зоны.
5. Использовать только в пределах указанного на этикетке срока годности.
6. Соблюдать правила хранения индикаторной бумаги.
7. Проводить оценку результатов в соответствии с указаниями, имеющимеся в инструкции.

Выполнение анализа мочи на анализаторе сухой химии мочи.

Ход определения. Из пенала извлекают полоску индикаторной бумаги и погружают ее в исследуемую мочу так, чтобы одновременно смочить обе индикаторные зоны. Через 2-3 с полоску помещают на белую стеклянную пластинку. Немедленно проводят оценку pH, пользуясь цветной шкалой, нанесенной на пенале. Значение pH на цветной шкале соответствуют 6,0 (или меньше); 7,0; 8,0; 9,0.

Подготовка мочи, приготовление препаратов из осадка мочи микроскопического исследования ориентировочным способом.

Микроскопическое исследование осадка мочи проводят ориентировочным методом при общем анализе и количественным подсчетом форменных элементов для более точной оценки степени луйкоцитурии и гематурии.

Правила подготовки осадка мочи для микроскопирования.

Микроскопическому исследованию подлежит первая утренняя порция мочи.

После предварительного перемешивания берут 10 мл мочи, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин.

Затем центрифужную пробирку с мочой резким движением опрокидывают, быстро сливают надосадочную жидкость в пустую банку.

Перемешивают, каплю помещают на предметное стекло и осторожно прикрывают покровным.

Если осадок состоит из нескольких слоев, то готовят препарат, а затем вновь центрифугируют и готовят препараты из каждого слоя в отдельности.

При отсутствии видимого на глаз осадка каплю мочи наносят на предметное стекло и мокроскопируют.

В начале материал рассматривают при малом увеличении (окуляр 7-10, обьектив 8), конденсор при этом опускают, несколько суживают диафрагму, затем препарат детально изучают при большом увеличении (окуляр 10,7 ; обьектив 40).

14.Количественное исследование осадка мочи по Нечипоренко.

Метод используется при скрытых вялотекущих воспалительных процессах (пиелонефрит, гломерулонефрит), скрытая пиурия. Для исследования патологического процесса в динамике. Для оценки эффективности проводимого лечения. Достоинства метода: технически прост, не требует большого кол-ва мочи и длитель. его хранения, применяется в амбулаторной практике. Обяз. условия : утренняя моча, средняя порция, кислая р-ция (в щелочной может быть частичный расспад клеточных элементов). 1. Перемешивают мочу.2.В мерную центрифужную пробирку помещают 10 мл мочи и центрифугируют 10 мин 1500 об/мин. 3. После центриф. отсасыв. Пипеткой верхнюю часть жидкости, оставл. ровно 1 мл осадка. 4.Осадок тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева. 5. Через 3-5 мин после заполн, приступают к подсчёту форменных элементов. 6.Подсчёт лейкоцитов,Er, цилиндров с окуляром 15 объективом 8 при опущ. конденсоре, в 100 больших квадратах камеры. Считают отдельно лейкоциты, Er, цилиндры (счит. не менее 4 камер Горяева) выводят сред. ариф. Х=А х 0,25х 10 6 /л. Норма: лейк. 2-4х 10 6 /л, Er до 1 х 10 6 /л, цилиндров до 0,02 х 10 6 /л (один на 4 камеры). У детей: лейк. до 2-4х 10 6 /л, Er до 0,75 х 10 6 /л, цилиндров до 0,02 х 10 6 /л.

15. Исследование мочи по Зимницкому

Этой пробой устанавливают способность почек концентр. и разводить мочу. Сущность пробы закл. в динамическом определении относительной плотности и кол-ва мочи в трёхчасыв порциях в течение суток. Проведение пробы: после опорожнения мочевого пузыря в 6 часов утра в унитаз, пациент через каждые три часа собирает мочу в отдельные банки в течение суток. Всего 8 порций. Ход исслед.: 1. Доставл. Мочу расставляют по часам и в каждой порции определяют кол-во и относительную плотность. 2. Сравнивают суточное кол-во мочи и кол-во выпитой жидкости, чтобы опред. % её выведения. 3. Вычисляют дневной и ночной диурез, суммируют, получают суточный диурез. 4. Устанавливают диапазон колебаний кол-ва и относительн. плотности мочи за сутки т.е. какова разница между самой малой порцией и большой. Показ. пробы у здор. людей: 1. Суточный диурез 800-1500 мл. 2. Дневной диурез значительно преобладает над ночным. 3.Колебания объёма мочи в отдельных порциях значительные (от 50 до 400 мл). 4. Колебания р от 1,003 до 1,028, должно быть более 0,008. При функ. недостаточности почек: гипостенурия, гипоизостенурия, изостенурия, гиперстенурия, олигурия, анурия, никтурия.

16. Описание общих свойств кала.

В норме кал состоит из продуктов секреции и экскреции пищеварит тракта, остатков неперевар или частично перевар пищевых продуктов, микробной флоры. Количество кала 100-150 г. Консистенция-плотная. Форма-цилиндрическая. Запах-каловый обычный. Цвет-коричневый. Р-ция- нейтральная, слабощелочная или слабокислая (рН 6,5-7,0-7,5). Слизь-отсутствует. Кровь-отсутствует. Остатки непереваренной пищи-отсутствует.

Определение СОЭ.

Водный р-р цитрата натрия 5%, объём крови 1:4. Набирают целый капилляр крови и смешивают с цитратом натрия(25 делений). Ставят в аппарат Панчекова на 1 час. Норма муж. 2-10 мм/ч, жен. 2-15 мм/ч. Ускоренная СОЭ-инф. воспал. процессы, лейкозы, злокачеств. новообразования. Замедление СОЭ-увеличение содержания альбуминов, желчных кислот.

Фиксация мазков крови.

Предохраняет форменные элементы крови от воздействия содержащейся в красках воды, под влиянием которой в нефиксированных препаратов происходит гемолиз эритроцитов и изменяется морфология лейкоцитов. Фиксатор также вызывает коагуляцию белков и закрепляет мазок на стекле. Фиксаторы: метиловый спирт (3-5 мин), р-р эозинметиленового синего по Май-Грюнвальду, этиловый спирт 960 (30 мин), хлороформ (несколько секунд), формалин (1 мин), смесь Никифорова (20 мин). Фиксацию проводят в специальных контейнерах, опускаяиз в кювету с фиксаором.

Обнаружение белка в моче пробой Геллера.

Р-вы 50% азотная к-та, р-в ларионовой. Ход определения в пробирку 1-1,5 мл азотной к-ты или реактив ларионовой и по стенком наливают 1-1,5 мл мочи, при наличии белка появится белое кольцо, чувств пробы 0,033 г/л. Появление кольца через 2-3 минуты

2.Обнаружение белка в моче с 20% сульфосалициловой кислотой.

Р-в: р-р 20% сск: 20г сск растворяют в 70 мл дис воды и доливают до 100 мл. ход определения: в 2 пробирки налить 2-3 мл центрифугир мочи слабокислой реакции, в 1 пробирку налить 3-4 капли р-ра сск, во 2 в нее приливают 2 мл дис воды. при наличии белка в пробирке с реактивом появл мутность или выподают хлопья, контрольпробирки остается прозрачным. Минимал кол-во белка в этой пробе 0,015 г/л.

следует предварительно профильтровать.

Проба с сульфосалициловой кислотой. Наиболее чувствительной и распространенной является проба с 20% раствором сульфосалициловой кислоты.

Ход определения. Две химические пробирки помечают: «О» - опыт и «К» - контроль. В обе пробирки наливают 4-5 мл прозрачной мочи. В опытную пробирку добавляют 4-5 капель 20% раствора сульфосалициловой кислоты, хорошо перемешивают. Обе пробирки рассматривают рядом на черном фоне. При наличии белка в опытной пробирке отмечается помутнение. Контрольная пробирка служит для сравнения. Чувствительность пробы с сульфосалициловой кислотой 0,015 г/л.

Продукты расщепления белка - альбумозы - также дают положительную реакцию с сульфосалициловой кислотой. Для выяснения причины помутнения пробу нагревают. При этом помутнение, вызванное присутствием альбу-моз, исчезает, а помутнение, вызванное присутствием белка, усиливается.

Кольцевая проба Геллера. Ход определения. В центрифужную пробирку наливают 1 - 1,5 мл 50% азотной кислоты или реактива Ларионовой. Затем наслаивают на

кислоту такое же количество мочи, так, чтобы жидкое не смешивались. При наличии белка на границе жидкосте] возникает белое кольцо. Реакцию оценивают на черном фоне и учитывают время появления нитевидного кольца Чувствительность пробы 0,033 г/л. При таком содержании белка на границе жидкостей появляется белое нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами.

Техника наслаивания. Мочу всегда наслаивают на кислоту, так как относительная плотность мочи ниже, чем кислоты. Наслаивание производят пастеровской пипеткой с баллоном, которой набирают небольшое количество мочи. Затем мочу вносят в узкую часть центрифужной пробирки, держа ее наклонно, наслаивают по каплям, медленно опуская мочу по стенкам пробирки.

Недостаток пробы заключается в появлении пигментного кольца от окисления урохрома азотной кислотой, Это коричневатое кольцо может мешать определению. В моче, содержащей ураты, иногда появляется беловатое кольцо выше границы жидкостей.

Более четкий результат пробы Геллера получается, если вместо 50% раствора азотной кислоты используют реактив Ларионовой (1% раствор азотной кислоты насыщенном растворе хлорида натрия).

Количественное определение

Количество белка в моче можно определить двумя способами: 1) методом Брандберга-Робертса - Столь-никова с разведением мочи; 2) по помутнению, образующемуся при добавлении 3% сульфосалициловой кислоты.

Метод Брандберга - Робертса - Стольникова. В основу этого метода положена кольцевая проба Геллера. Известно, что при содержании белка в моче в количестве 0,033 г/л образуется нитевидное кольцо на 2-3-й минуте Если белка в моче содержится больше, чем 0,033 г/л, то кольцо появляется раньше, причем не нитевидное широкое. Такую мочу следует развести дистиллированной водой и вновь уже с разведенной мочой проделать наслоение на азотную кислоту. Если после наслоенш появляется нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами, то разведение следует считать законченным. Количество белка в этом случае определяют, умножая 0,033 г/л нг степень разведения мочи. Разведение мочи подбирают пользуясь следующей ориентировочной оценкой свойст! кольца: если после наслаивания сразу появилось нитевидное кольцо, мочу разводят в 2 раза, если сразу появилос1 широкое кольцо-в 4 раза, если сразу появилось компак тное кольцо-в 8 или 10 раз.

Разведение мочи делают в мерной центрифужной робирке, наливая мочу до метки 1 мл и доливают водой до той метки, во сколько раз делается разведение. Содержимое пробирки тщательно перемешивают пастеровской пипеткой с баллоном.

Иногда приходится разводить мочу несколько раз. В этом случае при подсчете количества белка учитывают все разведения. Пример. При наслаивании цельной мочи появилось сразу компактное кольцо. Разводят мочу в мерной центрифужной пробирке в 10 раз (1 мл мочи и 9 мл воды до метки 10). Наслаивают разведенную в 10 раз мочу на азотную кислоту. Если сразу появляется широкое кольцо, то определение не закончено, его следует продолжить. Из первого разведения в 10 раз необходимо сделать еще разведение в 4 раза. Общая степень разведения в этом случае будет равна 40 (10x4). С разведенной в 40 раз мочой вновь ставят кольцевую пробу Геллера. При появлении нитевидного кольца между 2-й и 3-й минутами определение следует считать законченным.

При работе можно пользоваться поправкой Эрлиха- Альтгаузена, в случае, если нитевидное кольцо появляется ранее 2-й минуты. Чтобы не разводить мочу дополнительно, авторы предложили определить время появления нитевидного кольца и внести в расчет поправку на время. В этом случае количество белка рассчитывают умножая 0,033 г/л на степень разведения и на поправку. Значения поправок сведены в табл. 3.

Таблица 3. Значения поправок для определения белка

Время образования" Поправка кольца, мин Время образования Поправка кольца, мин

Кольцевая проба Геллера помогает проанализировать белковую составляющую мочи. Данный метод, разработанный Иосифом Геллером, базируется на физико-химическом процессе слипания. Для мочи требуется определенное состояние: при исследовании нужен прозрачный образец , который обладает кислой реакцией.

Для исследования используется концентрат азотной кислоты HNO3. Также под данный метод подойдет реактив Ларионовой. Чтоб изготовить его, подготавливается раствор хлористого натрия в концентрированном состоянии: двадцать пять миллиграмм соли добавляют в сто миллилитров воды.

Далее жидкость нагревают, при этом происходит полное растворение соли . После того, как раствор остывает, надосадочную составляющую удаляют и девяносто девять миллилитров объединяют с одним миллилитром концентрата HNO3. Его также можно заменить двумя миллилитрами концентрата хлористоводородной кислоты.

Алгоритм проведения

Для пробы Геллера потребуется пробирка, в которую помещается реактив в объеме от одного до двух миллилитров. Далее очень осторожно по стенке сосуда добавляется исследуемая моча в равной пропорции с реактивом. По прошествии трех минут взаимодействия присутствие белка проявится в виде мутной пограничной линии между мочой и реактивом. Это кольцо и является белковым денатуратом.

Ложный положительный эффект изучения может возникнуть в случае применения азотной кислоты, а также при большом количестве нуклеоальбуминов или же солей уратов. В первой ситуации кольцо растворяется, если слегка встряхнуть пробирку. Вторая ситуация предполагает наличие кольца, которое будет локализоваться немного выше разделяющей черты. Оно растворяется при повышении температуры жидкости. В некоторых случаях возникает кольцо коричневого окраса, это результат окисления урохрома азотной составляющей.

Сравнивая эффект от применения HNO3 и реактива Ларионовой, хочется отметить второй вариант как более точный. Он обладает рядом преимуществ:

• Реактив Ларионовой не дает при анализе пигментные кольца.
• Белковые кольца проявлены более четко, чем с использованием метода Геллера.
• Сохраняется азотная кислота.
• Реактив не так опасен и, оказываясь на ткани, не прожигает ее.

Минусы при использовании пробы

1. Использование пробы Геллера — довольно сложный процесс, для которого требуется довольно много времени, а также концентрат азотной кислоты.
2. Может возникать пигментное кольцо коричневого окраса, что препятствует выявлению белка.
3. В материале, в котором есть соль мочевой кислоты, может образовываться белое кольцо, располагающееся значительно выше линии, которая разделяет жидкости.
4. Также исследование способно давать ложные положительные результаты в случае большого количества мочевой кислоты.

Альтернатива

Быстрый и более простой способ определения белка в моче — с помощью специальной бумаги, которая является индикатором.

В этом варианте исследования в материал погружается бумажная полоска, которая содержит в себе особую пропитку, благодаря чему индикаторная бумага при контакте с мочой приобретает цвет в диапазоне от желтого к синему. Оттенок указывает концентрацию белка. Существует шкала, по которой можно сделать данное заключение.

Для того чтобы результат был максимально точным, следует придерживаться некоторых правил:

• рН материала должен находиться на отметке от 3,0 до 3,5 . Большое количество щелочи даст ложный положительный результат, а в случае большого количества кислоты в моче – ложный отрицательный.
• Бумажный индикатор не должен контактировать с материалом больше положенного времени. Иначе результат будет необъективным.
• Также при слишком большом количестве слизи может быть ложный положительный результат.
• В зависимости от бумаги и ее производителя чувствительность индикатора может быть разной. Так что не следует полностью полагаться на данный тест в отношении содержания белка в моче.
• Суточная моча не может показать количество белка.

Принцип метода:

Относительная плотность мочи составляет в норме 1,015-1,025 г/см 3 . Определение относительной плотности мочи производят с помощью специальных ареометров небольшого размера, называемых урометрами. Урометры бывают двух типов: первый - для мочи с низкой и нормальной относительной плотностью (с делениями от 1,000 до 1,030 г/см 3), второй - для мочи с высокой относительной плотностью (с делениями от 1,030 до 1,060 г/см 3).

ХОД РАБОТЫ

В небольшой цилиндр с таким диаметром, чтобы урометр свободно плавал в нем, наливают по стенке исследуемую мочу и осторожно погружают в нее урометр. Производят отсчет, беря ту линию на шкале урометра, которая соответствует нижнему мениску жидкости. Все определения производят при температуре 20 0 С, поскольку шкала урометра проградуирована в соответствии с этой температурой. Если моча имеет другую температуру, то на каждые 3 0 С свыше этой температуры нужно прибавить, а на каждые 3 0 С ниже – убавить по 0,001 от показания шкалы урометра.

Обнаружение патологических компонентов мочи

1. Качественные реакции на обнаружение белка в моче – а) проба Геллера с концентрированной азотной кислотой

Принцип метода:

Концентрированная минеральная кислота НNO 3 вызывает денатурацию белка и образует комплексные соли белка с кислотой. На границе двух слоев жидкостей образуется осадок в виде небольшого белого кольца.

Ход работы

В пробирку наливают 1 мл концентрированной НNO 3 , наклоняют пробирку под углом 45 0 и осторожно по стенке пипеткой наслаивают 1мл мочи.

б) проба с концентрированной сульфосалициловой кислотой

Принцип метода:

Концентрированная органическая сульфосалициловая кислота вызывает денатурацию белка. Выпадение белка в виде осадка или мути связано с дегидратацией белковых частиц и образованием комплексных солей белка с кислотами.

Ход работы

К 1 мл мочи приливают 3 капли 20% сульфосалициловой кислоты. При наличии белка в моче образуется белый осадок.

2. Количественное определение белка в моче с помощью

тест – полоски «Альбуфан» .

Принцип метода:

Тест основан на принципе «белковой ошибки индикатора». Реактивная зона содержит кислородный буфер и специальный индикатор, который в присутствии белков меняет цвет с желтого через зеленый до синего.

Тест высокочувствителен к альбумину и реагирует на его присутствие в моче при концентрации 0,10-0,15 г/л. Высокомолекулярные белки, такие как иммуноглобулины, измеряются с меньшей чувствительностью, чем альбумины. Низкомолекулярные белки, такие как бета-2 микроглобулин, белок Бенс -Джонса практически не выявляется этим тестом.

Оценка теста: положительным тест считается в том случае, если меняется цвет реактивной зоны. В зависимости от концентрации альбумина в моче реактивная зона может приобретать оттенок от зеленого до синего. Эти оттенки сравниваются с цветной шкалой, зоны которой соответствуют концентрации белка 0,3, 1, 3, 10 г/л.

ХОД РАБОТЫ

Тест-полоску, не касаясь реактивной зоны руками, опустить на 1-2 секунды в исследуемую мочу так, чтобы зона была смочена. Затем удалить излишки мочи с полоски и приблизительно через 1 минуту сравнить окраску зоны индикации с цветной шкалой на наборе и определить количество белка, которое выражено в г/л.

Проба имеет чувствительность 0,033 г/л и используется в клинической диагностике протеинурии . Принцип выявления белка основан на его денатурации под воздействием денатурирующего фактора - концентрированной азотной кислоты или реактива Ларионовой .

Следует отметить, что в моче всегда присутствует некоторое количество белка, но, как правило, его концентрация в моче здорового человека ниже порога чувствительности качественной реакции и не выявляется простыми методами. Для количеств белка свыше 0,033 г/л проба непригодна. При более высоких концентрациях необходимо разбавлять мочу или использовать альбуминометр Эсбаха.

Для определения количества общего белка в моче используются метод, основанный на пробе Геллера - метод Брандберга-Робертса-Стольникова (W. Roberts, 1830-1899, англ. терапевт). Методика предполагает разведение мочи до нижнего предела чувствительности пробы (0,033 г/л) и времени образования кольца в 2-3 минуты.

Ход выполнения анализа

Реактивы: концентрированная (дымящаяся) азотная кислота или реактив Ларионовой. Исследуемая моча должна быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Приготовление реактива Ларионовой

Приготавливают насыщенный раствор хлорида натрия (20-30 г соли растворяют в 100 мл теплой воды, дают отстояться до охлаждения). Надосадочную жидкость сливают и фильтруют. К 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты (можно заменить 2 мл соляной кислоты).

Техника исследования

В пробирку с 1-2 мл реактива осторожно по стенке наслаивают примерно такое же количество мочи. При наличии белка, примерно через 2-3 минуты, на границе раздела жидкостей наблюдается помутнение - белое кольцо из денатурировашего белка.

Ложноположительный результат может появиться при использовании азотной кислоты, за счет высокой концентрации нуклеоальбуминов или солей уратов. В первом случае оно исчезает при легком покачивании пробирки, а во втором кольцо располагается значительно выше границы раздела сред и исчезает при нагревании; при повторении пробы с разбавленной мочой кольцо не образуется. Иногда также появляется коричневатое пигментное кольцо от окисления урохрома азотной кислотой.

Использование реактива Ларионовой, в отличие от азотной кислоты, имеет ряд преимуществ: на границе наслоения не образуется пигментных колец, а положительный результат дает более четкие белковые кольца.

См. также

Напишите отзыв о статье "Проба Геллера"

Ссылки

Литература

К:Википедия:Статьи без изображений (тип: не указан)

Отрывок, характеризующий Проба Геллера

Граф опять пошел за перегородку и лег. Графиня подошла к Наташе, дотронулась перевернутой рукой до ее головы, как это она делала, когда дочь ее бывала больна, потом дотронулась до ее лба губами, как бы для того, чтобы узнать, есть ли жар, и поцеловала ее.
– Ты озябла. Ты вся дрожишь. Ты бы ложилась, – сказала она.
– Ложиться? Да, хорошо, я лягу. Я сейчас лягу, – сказала Наташа.
С тех пор как Наташе в нынешнее утро сказали о том, что князь Андрей тяжело ранен и едет с ними, она только в первую минуту много спрашивала о том, куда? как? опасно ли он ранен? и можно ли ей видеть его? Но после того как ей сказали, что видеть его ей нельзя, что он ранен тяжело, но что жизнь его не в опасности, она, очевидно, не поверив тому, что ей говорили, но убедившись, что сколько бы она ни говорила, ей будут отвечать одно и то же, перестала спрашивать и говорить. Всю дорогу с большими глазами, которые так знала и которых выражения так боялась графиня, Наташа сидела неподвижно в углу кареты и так же сидела теперь на лавке, на которую села. Что то она задумывала, что то она решала или уже решила в своем уме теперь, – это знала графиня, но что это такое было, она не знала, и это то страшило и мучило ее.
– Наташа, разденься, голубушка, ложись на мою постель. (Только графине одной была постелена постель на кровати; m me Schoss и обе барышни должны были спать на полу на сене.)
– Нет, мама, я лягу тут, на полу, – сердито сказала Наташа, подошла к окну и отворила его. Стон адъютанта из открытого окна послышался явственнее. Она высунула голову в сырой воздух ночи, и графиня видела, как тонкие плечи ее тряслись от рыданий и бились о раму. Наташа знала, что стонал не князь Андрей. Она знала, что князь Андрей лежал в той же связи, где они были, в другой избе через сени; но этот страшный неумолкавший стон заставил зарыдать ее. Графиня переглянулась с Соней.
– Ложись, голубушка, ложись, мой дружок, – сказала графиня, слегка дотрогиваясь рукой до плеча Наташи. – Ну, ложись же.
– Ах, да… Я сейчас, сейчас лягу, – сказала Наташа, поспешно раздеваясь и обрывая завязки юбок. Скинув платье и надев кофту, она, подвернув ноги, села на приготовленную на полу постель и, перекинув через плечо наперед свою недлинную тонкую косу, стала переплетать ее. Тонкие длинные привычные пальцы быстро, ловко разбирали, плели, завязывали косу. Голова Наташи привычным жестом поворачивалась то в одну, то в другую сторону, но глаза, лихорадочно открытые, неподвижно смотрели прямо. Когда ночной костюм был окончен, Наташа тихо опустилась на простыню, постланную на сено с края от двери.
– Наташа, ты в середину ляг, – сказала Соня.
– Нет, я тут, – проговорила Наташа. – Да ложитесь же, – прибавила она с досадой. И она зарылась лицом в подушку.